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Simple-Fect转染试剂
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Simple-Fect转染试剂
货号：TD-ZR-001
容积：1.5ml（1mg/ml）
储存条件：在2-8°C下储存
有效期：5年
预期用途：仅供科研使用
概述
Simple-Fect转染试剂是一种用于将核酸（DNA）转染到真核细胞中的新型阳离子聚合物试剂，具有以下优点：
- 在不同细胞类型和形式中具有高转染效率。
- 在含有血清的培养基中，Simple-Fect/DNA复合物可以直接添加到培养基中。
- 转染后，不需要更换培养基和去除Simple-Fect/DNA复合物。
质粒DNA转染粘附细胞
1.1 细胞培养
在使用Simple-Fect转染试剂转染的前一天使用不含抗生素的培养基培养细胞，可提高细胞的转染效率达70-90%。
|
培养体系 |
需转染的细胞数量 |
每个孔或板的 表面积（cm2） |
孔板或平皿的 体积（ml） |
|---|---|---|---|
|
96孔板 |
1×104-1.7×104 |
0.3 |
0.1-0.2ml |
|
48孔板 |
2.5×104-5×104 |
1. |
0.25-0.5ml |
|
24孔板 |
0.5×105-1×105 |
1.9 |
0.5-1ml |
|
12孔板 |
0.8×105-2×105 |
3.8 |
1-2ml |
|
6孔板 |
2×105-4×105 |
9.4 |
2-4ml |
|
6 cm平皿 |
4×105-8×105 |
28 |
5-10ml |
|
10 cm平皿 |
1×106-2×106 |
78.5 |
10-20ml |
|
14 cm平皿 |
2×106-5×106 |
153 |
20-40ml |
1.2 转染实验流程
以6 cm培养皿为例。如需放大或缩小体系，参见以下表格。
- 将4µg DNA加入500µl DMEM（不含血清）培养基中，吹打混匀。
- Simple-Fect试剂在使用前需先瞬时离心，使试剂置于管底。将12µl Simple-Fect试剂加入稀释好的DNA中，吹打混匀。
- 在室温下培养15到20分钟（同时每个培养皿更换2ml含血清的培养基）。
- 将500µl Simple-Fect/DNA复合物加入含有细胞的培养皿中，轻轻前后左右晃动培养皿，使转染混合物与细胞充分接触。
- 将培养皿放入37°C的CO2培养箱中培养4小时后再向培养皿中加入3ml含有血清的新鲜培养基。
- 细胞在37°C的CO2培养箱中培养24-48小时后即可测试基因表达。
不同培养体系参考表
|
培养体系 |
DNA量（ug） |
无血清培养基 体积（μl） |
Simple-Fect试剂 体积（μl） |
|---|---|---|---|
|
96孔板 |
0.05-0.2 |
20 |
0.15-0.6 |
|
48孔板 |
0.1-0.4 |
50 |
0.6-1.5 |
|
24孔板 |
0.2-0.5 |
100 |
1.5-3.0 |
|
12孔板 |
0.5-1.5 |
100 |
3.0-4.5 |
|
6孔板 |
1-3 |
200 |
4.5-9 |
|
6 cm平皿 |
4 |
500 |
9-12 |
|
10 cm平皿 |
4-8 |
1000 |
12-24 |
|
14 cm平皿 |
8-10 |
2000 |
24-30 |
1.3 转染结果
|
GFP-293T 24小时 |
GFP-HCT116 48小时 |
|
|
|