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PNGase F
Catalog Number：CSE00005
概述（Summary）
| 产品英文名（Product Name） | PNGase F |
| 产品中文名 | 肽 N-糖苷酶 |
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产品描述（Description） |
肽 N-糖苷酶 F (PNGase F)是一种酰胺水解酶，主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌 分泌。 PNGase F 可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖，及杂合和复杂的寡糖糖蛋 白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧 N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残 基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。 PNGase F 不会去除常见植物糖蛋白上含有核心 α-(1,3)- 岩藻糖连接的寡糖。 |
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储存条件（Storage） |
储存于 -20°C，保质期 12 个月。 |
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运输方式（Shipping） |
蓝冰运输 |
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Note |
For research use only . |
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状态（Form） |
Liquid |
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储存溶液（Buffer） |
20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol |
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表达宿主（Host） |
E. coli |
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酶切位点 |
PNGase F 几乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有 N-连接糖 (x = H 或寡糖) 。 |
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分子量 |
36 kDa |
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酶活 |
120000U/ml |
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酶活单位定义 |
1 个酶活力单位指在 10ul 的反应体系中，37℃条件下 1 小时从 10ug 变性 RNase B 中除去超过 95%的碳水化合物所需要的酶量定义为一个活性单位（U）。 |
使用方法（Standard OperatingProcedure）
在变性条件下进行 SDS-PAGE 的蛋白质去糖基化
- 在水中加入 1~20μg 目标糖蛋白、Glycoprotein Denaturing Buffer (10X) 1μl 至 最终体积为 10μl。
- 在 100°C 加热 10min 使样品变性。
- 将样品在冰上冷却，离心 10 秒。
- 加入 2μl 的GlycoBuffer 2(10X)、2ul 的 10% NP-40、6μl 去离子水，总反应体积为 20ul。
- 加入 1μl 的 PNGase F, 轻轻混匀。
- 37°C 孵育1h。
注意：糖蛋白底物的差异，可能需要延长孵育时间。
在非变性条件下进行 SDS-PAGE 的蛋白质去糖基化
- 在水中加入 1~20μg 目标糖蛋白、GlycoBuffer 2 (10X) 2 μ l 至最终体积为 20μl。
- 加入 2~5μl 的 PNGase F, 轻轻混匀。
- 37°C 孵育4-24h。
注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加 PNGase F 的量和延长孵育时间。
实验示例（Experiment Example）
1X Glycoprotein Denaturing Buffer 0.5% SDS
40 mM DTT
1X NP-40
1% NP-40 in MilliQ-H2O
1X GlycoBuffer 2
20 mM Tris,PH 7.5