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BSA 酶联免疫检测试剂盒
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BSA 酶联免疫检测试剂盒
TD-BK401
一、试剂盒简介
此定量检测牛血清白蛋白（BSA）酶联免疫试剂盒，采用抗 BSA 的单克隆 配对抗体，分别作为包被抗体和检测抗体，组成双抗体夹心 ELISA 检测试剂盒， 并与美国标准局的 BSA 标准品为参照标准，本试剂盒最低可检测到 1ng/mL 的 BSA。
二、试剂盒组份：
2.1 抗 BSA 单克隆抗体包被的 96 孔板条： 1 块
2.2 BSA 标准品32ng/mL、16ng/mL、8ng/mL、4ng/mL、
2ng/mL、1ng/mL、0ng/mL ： 各 1 瓶（0.4mL/瓶）
2.3 BSA 内部参比（20ng/mL）： 1 瓶（0.4mL/瓶）
2.4 TMB底物显色液： 1套（A和B各6.5mL）
2.5 显色底物终止液（2N，H2SO4）： 1 瓶（13mL）
2.6 样品稀释液 ： 1 瓶（13mL）
2.7 洗涤液（10 倍浓缩）： 1 瓶（50mL）
2.8 使用说明书： 1 份
2.9 酶标记抗 BSA 抗体： 1 瓶（0.13mL）
2.10 酶标记抗体稀释液： 1 瓶（13mL）
三、保存：
本试剂盒应于 2-8℃保存，有效期 6 个月。
四、所需仪器：
酶标仪（波长 450nm），10μL、100μL、1mL 移液器，300μl 多道移液器， 移液器吸头、37℃恒温水浴箱。
五、操作步骤：
5.1 将浓缩洗涤液用蒸馏水做 10 倍稀释。
5.2 取出包被有抗 BSA 的 96 孔酶标板在室温放置回温。标准品各浓度做平行两 孔，50μL/孔加入酶标板中。加待检样品、内部参比，各两孔，50μL/孔。然后将酶标记抗体用酶标抗体稀释液做 1:100 稀释，加入各反应孔，100μL/孔（酶标记 抗体用多少稀释多少，现用现配）。加样过程须在 15 分钟内完成。
5.3 置室温 20~24℃避光反应 1 小时，用洗涤液洗涤四遍，拍干。
5.4 用移液器加 TMB 底物显色液 100μL/孔，请勿震荡，室温 20~24℃避光反应 10 分钟。
5.5 用移液器加终止液 100μL/孔，稍微震荡 5s 混匀。
5.6 在酶标仪 450nm 波长处读数。
六、注意事项：
6.1 如样品中 BSA 含量高于 32ng/mL，可将样品做适当稀释。
6.2 样品如为冻干制剂，应用样品稀释液充分溶解混匀。
6.3 反应时应将整板放入洁净的密闭空间中，为防止反应孔中落入异物。
6.4 洗涤拍干后，应消除各孔内残余的气泡。
6.5 开封后，将未使用的板条放回加入干燥剂的密封塑料袋中，置 4℃密闭保存。
6.6 在操作过程中，所使用的移液器吸头、洗涤机（瓶）、器皿等均应严格避免 被有 BSA 的环境和物品污染。
七、结果判定
7.1 实验有效参数
实验结果须满足以下有效参数为成立：
0ng/mlOD 值≤0.1； 32ng/mlOD 值≥0.80； 阳性参考 18~22ng/ml； R 2≥0.98；
7.2 计算
在 EXCEL 里面以标准浓度为横坐标，消零 OD 值为纵坐标作散点图，添加 趋势线，再显示曲线方程和 R 2 值，将检测样品 OD值消零处理后带入直线方程计算对 应的浓度。
7.3 判定
在标准曲线中，设 OD0~16ng/mL 为区间 A；OD16~32ng/mL 为区间 B；大于 OD32 ng/mL 为区间 C。
7.3.1 如测得的 OD 值小于标准曲线中 2ng/mL 对应 OD 值，则 BSA 含量测定结 果计为小于 2ng/mL。
7.3.2 如不同稀释浓度的样本测得的 OD 值均位于区间 A，则最终结果计算取其 最低稀释度的测定值。
7.3.3 如不同稀释度的测定值均位于区间 B 或同时位于区间 A 和 B 或同时位于区 间 B 和 C，则取其最接近 OD16ng/mL 的测定值。
7.3.4 如不同稀释度测定值均位于区间 C，则需将样本做进一步稀释测定，使其 测定值居 2~32ng/mL 所对应的 OD 值区间，计算方法按上述 7.3.2-4。
7.3.5 如高稀释度测得 OD 高于低稀释度或未稀释的样本 OD，则可能是操作失误 或样本中 BSA 含量过高（HOOK 效应），需重试或调整稀释度。
7.3.6 最终结果要考虑稀释因素（实际 BSA 含量＝计算值 X 稀释倍数）。
八、本试剂盒技术指标
8.1 检测限和定量限
检测限：零浓度标准品加上两倍的标准差（20 个零孔计算值），本试剂盒检测限计算为 0.2ng/mL(ppb)。定量限为标准曲线检测下限，1 ng/mL。
8.2 准确度和精密度
计算批内批间变异系数，在高中低三个浓度（20、10、5）下五个重复检测计算批内变 异系数，不同时间重复三次计算批间变异系数，CV%均小于 10%。
8.3 交叉反应
本试剂盒对人血白蛋白，小鼠血清，兔血清，鱼明胶没有交叉反应，而对山 羊血清有 10%的交叉反应（以相同 OD 值时 BSA 和山羊血清的浓度的比值的百 分数为准）。
8.4 钩状效应
当样品浓度远高于标准曲线最高浓度的时候，会产生 HOOK 效应，即反应OD 值小于 32ng/mL 的 BSA 时候的浓度，本试剂盒为 500μg/mL 以上。