根据融合蛋白的标签类型和蛋白质本身的理化特性设计最佳纯化方案。常用的纯化方法包括：亲和层析、疏水层析、离子交换层析、分子筛、盐析等。我们保证的最低纯度标准为〉85%。如果初始纯化未达到此标准或客户有更高的纯度要求，我们还拥有AKATA纯化仪器，该仪器高度自动化、精确控制，结合使用各种柱子，确保我们的蛋白质产品的纯度进一步提高，并在COA报告上显示最终纯度测试结果。

虽然我们保证的最低纯度标准为>85%，但我们制备的一些蛋白质的纯度达到了95%甚至97%。

可能存在的原因有：

a. 向量构建错误。您应该通过测序确认向量或申请CUSABIO定制克隆服务。

b. 稀有密码子。你应该优化密码子，使用补充稀有密码子的菌株，在较低的温度下诱导或在较差的培养基中生长

c. 蛋白质毒性。您应该使用调控更严格的启动子或较低的质粒拷贝数。在基于T7系统的菌株中使用pLysS/pLysE菌株，或者选择更适合表达毒性蛋白质的菌株。在高OD值下开始诱导并缩短诱导时间。在使用含有Lac启动子的表达载体时添加葡萄糖。

为了获得具有生物活性的蛋白质，您应选择正确的表达系统、适当地表达载体、合适的纯化方法以及验证实验。此外，您还可以检查以下问题：

a. 蛋白质的溶解度较低。您可以将所需的蛋白质与融合伴侣融合，并降低温度。

b. 缺乏必要的翻译后修饰。您应选择另一个表达系统。

c. 折叠不完整。您应使用融合伴侣，并使用具有冷适应分子伴侣的菌株。在较低温度下与分子伴侣共同表达。监测二硫键的形成，并允许进一步的体外折叠。

d. cDNA中的突变。您应在诱导前后测序质粒，或使用recA－菌株确保质粒的稳定性。在每次表达循环前转化大肠杆菌。

a. 高亲水性或跨膜结构的蛋白质。您应该添加融合标签或加入热休克分子伴侣。在低温下较短时间诱导表达，或者转换至贫负载培养基。产生截短形式的蛋白质或使用富含膜的菌株。

b. 错误的二硫键形成。您应该添加融合伴侣蛋白，包括巯基还原酶、DsbA和DsbC。克隆到含有分泌信号肽的质粒中，使其分泌到细胞外腔。使用具有氧化型胞质环境的gamiB (DE3）菌株。降低诱导剂浓度和诱导温度。

c. 错误的折叠。您应该使用融合伴侣蛋白。与分子伴侣一同共表达。使用具有冷适应分子伴侣的菌株。向培养基中添加化学分子伴侣和辅因子。降低诱导剂浓度并添加新鲜培养基。在低温下较短时间诱导表达。

可能存在的原因有：

a. 蛋白质序列中包含罕见的氨基酸硒蛋白质（Sec）或吡咯赖氨酸（Pyl）。您应该使用其他氨基酸来代替这两种不常见的氨基酸。

b. 融合蛋白质的翻译过程不平衡。您应该更换其他的融合标签或将融合标签移到C端。在低温下较短时间诱导表达，或者转换至贫负载培养基。

c. 蛋白质降解。您应该替换特定的蛋白酶位点。使用蛋白酶缺陷菌株。在高光密度下诱导表达。在低温下较短时间诱导表达，或者在破碎细胞时使用蛋白酶抑制剂。

可能存在的原因有：

a. 翻译后修饰。如磷酸化、糖基化等会增加蛋白质的大小。

b. 翻译后剪切。许多蛋白质首先合成为前蛋白质，然后通过剪切产生活性形式。

c. 剪接变体。剪接变异可能从同一基因产生不同大小的蛋白质。

d. 相对电荷。氨基酸的组成具有不同的相对电荷，这会影响电泳迁移性。

e. 多聚体，例如蛋白质的二聚化。通常在还原条件下会被阻止，尽管强烈的相互作用可能会导致出现较高的带状。

f. 蛋白质结构，如二硫键、蛋白质二级结构或蛋白质三维结构形成。

g. 疏水性蛋白质，如跨膜蛋白质，可能难以迁移到凝胶中，从而导致不同的多带图案。

在打开盖子之前，请先离心试剂管。

对于短期储存或使用，请使用无菌去离子水将蛋白质完全重溶至0.1-1.0 mg/mL。如有需要，重溶后经过10—15分钟后进行分装，并储存在4℃。

对于长期储存，建议将细胞因子或重组蛋白添加5%-50%的甘油（最终浓度），并进行分装以长期储存在-20℃/-80℃。我们默认的甘油最终浓度为50%。客户可以参考此浓度。

Tanda提供的常见标签包括His-tag、FLAG-tag、GST-tag、MBP-tag、组合标签（His-GST-tag、His-sumo-tag、His-MBP-tag）等。有时，在制造过程中会确定蛋白质的标签类型。如果您有指定的标签类型，请随时与我们咨询。

从理论上讲，小的标签对蛋白质活性影响很小。然而，具体对蛋白质活性的影响无法一概而论（有些蛋白质没有影响，有些蛋白质有轻微影响，而有些蛋白质可能有较大影响）。