多肽的溶解性主要取决于其氨基酸序列。若产品未提供溶解建议,请按以下步骤操作:
1. 初始溶解步骤
- 溶剂选择:优先使用无菌水,配制浓度为 1-10 mg/mL。
- 超声处理:若未完全溶解,可短暂超声,帮助溶解。
2. 难溶多肽的处理
若初始溶解不完全,根据多肽的酸碱性质调整:
- 酸性多肽(含较多Glu、Asp或游离C端):
逐滴加入 0.1 M 氢氧化铵(NH₄OH) 至完全溶解(pH升高可增加溶解度)。 - 碱性多肽(含较多Lys、Arg、His或游离N端):
逐滴加入 0.1 M 乙酸(CH₃COOH) 至完全溶解(pH降低可增加溶解度)。
酸碱性质判断:
- 酸性残基:谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、游离C端(-COOH)。
- 碱性残基:赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)、游离N端(-NH₂)。
- 酸性多肽:酸性残基数 > 碱性残基数。
- 碱性多肽:碱性残基数 > 酸性残基数
3. 有机溶剂的使用
若多肽在水中仍难溶,可尝试以下有机溶剂:
常用溶剂:DMSO、DMF、DMA、异丙醇、乙醇。
操作建议:
1、先用 100% 纯溶剂 溶解多肽(如DMSO)。
2、逐步用无菌水稀释至所需浓度(避免直接高比例稀释导致沉淀)。
4. 重要注意事项
- 避免盐缓冲液:在完全溶解前,勿加入PBS等含盐缓冲液(盐离子可能引发沉淀)。
- 浓度控制:过高的初始浓度(>10 mg/mL)可能导致聚集,建议从低浓度开始优化。
所用溶剂成分应优先确定对后续实验没有影响后再开始溶解多肽。
5. 操作流程示例
- 1、取1 mg多肽,加入1 mL无菌水(1 mg/mL),涡旋混匀。
- 2、若未完全溶解,冰浴超声30秒。
- 3、仍不溶?检查序列酸碱性质:
若为酸性多肽,加入0.1 M NH₄OH(每次5 μL,混匀观察)。
若为碱性多肽,加入0.1 M乙酸(同上)。 - 4、若水溶液失败,改用50 μL纯DMSO溶解,再加水稀释至1 mL。