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杆状病毒-昆虫细胞表达与纯化服务
服务简介

 

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杆状病毒-昆虫细胞表达系统(BEVS)属于真核表达系统的一种,该表达系统具有较高的安全性,并且基因组比较大,可以插入较大的外源基因,在大分子量的蛋白表达方面具有很大优势。并且具有完备的翻译后加工修饰和高效表达外源基因的能力。该系统由转移载体、杆状病毒载体和宿主细胞组成。该系统采用一个或多个杆状病毒的超强启动子,将外源目的基因插入到启动子后,获得重组病毒,这种重组病毒在昆虫细胞复制的同时,使外源基因得到高效表达。BEVS被广泛应用于病毒疫苗开发(如流感病毒和HPV疫苗开发)、信号蛋白制备、细胞因子制备、激酶开发等方面。

 

 

系统优势

  1. 基因容量大,可携带较大的基因片段,表达大分子量蛋白有优势;
  2. 安全性高,杆状病毒具有严格的种属特异性;
  3. 表达效率高,在被感染的晚期细胞中,蛋白可进行高效地表达;
  4. 表达产物的翻译后修饰,尤其糖基化修饰与哺乳动物细胞类似,表达产物具有生物活性的可能性较高;
  5. 杆状病毒较易扩增,可以大规模生产重组蛋白。

 

服务优势

  1. 天德生物独有的表达体系,可实现bacmid低成本、大体积悬浮转染,且滴度高,可用于感染放大制备蛋白,较经典流程周期可缩短1-2周;
  2. 高性价比,价格低至6500元起;
  3. 货期短:最短35工作日即可交付;
  4. 产量高,最高可达100mg/L。
服务内容
步骤 服务项目 服务说明 特色 周期
1 质粒构建
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密码子优化全基因合成 多载体优化
为了提高表达成功率以及获得更高表达量,进行多信号肽优化,在确保纯度的同时更大程度保证了蛋白的活性。
8-12工作日
PCR扩增产物通过酶切连接到pFastbac1等载体上
转化TOP10宿主
获得测序正确的重组质粒
2 重组Bacmid及高滴度病毒制备
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转化DH10Bac构建重组Bacmid,PCR鉴定,提取Bacmid。 悬浮转染
悬浮转染方式大大提高了蛋白表达量,有效缩短实验周期。
9-11工 作日
重组Bacmid转染昆虫细胞,得到P0代病毒,电泳检测表达量,如有需要再将P0代病毒感染细胞得到P1-P2代病毒
3 扩大表达与纯化
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P1或p2代病毒感染昆虫细胞 优化表达
经过优化后,通过一步转染培养最快5天内即可得到大量的目的蛋白,低代数的病毒毒液感染细胞即可得到大量目的蛋白。
8-10工 作日
通过亲和、离子交换、疏水及分子筛等多种层析方法纯化目的蛋白
4 其他(可选)
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收费:通过酶切去除标签 灵活的附加服务
提供多种附加服务,客户可根据实验需求灵活选择
3个工 作日
免费:可提供无菌操作、内毒素去除和冻干等服务(备注:冻干与无菌操作不可同时满足) 2个 工作日
5 质控
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进行纯度、浓度等检查,并提供QC报告 报告详细
为每个项目提供产品说明书及完善的质控报告
3-5工 作日
总时间 28-38工作日
服务特色

特色表达体系

● pFastbac1-KHM载体+sf9细胞高效表达
  • 1.无缝克隆连接不惧任何内切酶位点;
  • 2.N端含有10xHis较常规6xHis在IMAC中具有更强结合能力,同时含有凝血酶位点,可通过酶切去除标签得到无标签蛋白;
  • 3.C端含有MYC-tag可应用于标签抗体WB检测,较His-tag具有更强灵敏度;
  • 4.Amp抗性筛选。

 

QA/QC

无风险定制,不成功不收费

注:该无风险定制蛋白服务仅适用于800个氨基酸以内的蛋白质。如果您需要表达超过800个氨基酸的蛋白质,我们将按步骤收费。