酵母蛋白表达系统是一种高经济性的真核表达系统，可分泌表达表达也可胞内表达。
酵母表达外源基因具有一定的翻译后加工能力，所表达的外源蛋白质具有一定程度上的折叠加工和糖基化修饰，性质较原核表达的蛋白质更加稳定，特别适用于真核基因表达和功能蛋白的制备。
酵母分泌表达可以将表达的外源蛋白分泌到细胞外基质中，因此更容易获得高纯度蛋白。
酵母表达系统具有的诸多优势使其研究和应用越来越广泛。
| 步骤 | 服务项目 | 服务说明 | 特色 | 周期 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 表达载体构建
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密码子优化全基因合成 | 多载体优化 为了提高的表达成功率以及获得更高表达量，除常规N端融合表达蛋白外，我们还提供C端融合标签，在确保纯度的同时更大程度保证了蛋白的活性。 |
8-10工作日 | |
| PCR扩增产物酶切连接到pPic9k,pPic3.5k,pPiczαA等载体上 | |||||
| 转化TOP10宿主 | |||||
| 获得测序正确的重组质粒 | |||||
| 2 | 转化及菌株鉴定
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重组质粒大量制备 | 高拷贝筛选 通过不同载体特有的筛选标记进行多轮筛选，逐步得到表达量最高的菌株。 |
铜离子胁迫专利 转化后免筛选直接可获得高表达量菌株，时间相比传统筛选减少5-10工作日。 |
5-18工作日 |
| 线性化重组质粒 | |||||
| 电击转化至GS115、X33、KM71等宿主 | |||||
| PCR鉴定挑选阳性菌株 | |||||
| 用遗传霉素G418、Zeocion等抗生素进行多拷贝子筛选，获得高拷贝子 | |||||
| 3 | 小试及放大表达纯化
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小试表达筛选（20-40株） | 多条件纯化策略（可选） 完善的DOE方案，利用AKTA对离子交换、疏水等层析条件进行摸索，锁定最适纯化策略。 |
9-12工作日/12-17工作日（特色纯化） | |
| 定株，优化表达条件 | |||||
| 放大培养 | |||||
| 通过亲和、离子交换、疏水及分子筛等多种层析方法纯化目的蛋白 | |||||
| 4 | 其他（可选）
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通过酶切去除标签或采用无标签载体表达 | 灵活的附加服务（可选） 提供多种附加服务，客户可根据实验需求灵活选择 |
3个工作日 | |
| 提供无菌过滤及内毒素去除服务 | 2个工作日 | ||||
| 5 | 质控
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蛋白浓度、纯度等检查，并提供QC报告 | 详细的质控报告 为每个项目提供产品说明书及完善的质控报告 |
3-5工作日 | |
| 总时间 | 23-35工作日 | ||||
● pPic9k-JT质粒+GS115菌株高效表达
载体特色
１．携带有AOX1强启动子，含有alpha分泌因子可高效分泌表达；
２．无缝克隆连接不惧任何内切酶位点；
３．多个线性化位点：SalⅠ，SacⅠ，BglⅡ；
４．原核阶段可进行Amp和Kan双抗性筛选阳性菌株；
５．真核阶段可进行His+和G418筛选高表达菌株；
６．改造过的多克隆位点，克隆不受目的基因中潜在的核酸内切酶位点限制；
７．载体自带his 标签，方便克隆与纯化。
● pPic9k-SUMOSTAR质粒+GS115菌株高效表达
载体特色
１．携带有AOX1强启动子，含有alpha分泌因子可高效分泌表达；
２．含有SUMOSTAR融合蛋白，具有很强促表达能力；
３．无缝克隆连接不惧任何内切酶位点；
４．含有EK酶切位点，酶切可得到无标签蛋白；
５．多个线性化位点：SalⅠ，SacⅠ；
６．原核阶段可进行Amp和Kan双抗性筛选阳性菌株；
７．真核阶段可进行His+和G418筛选高表达菌株；
８．改造过的多克隆位点，克隆不受目的基因中潜在的核酸内切酶位点限制；
９．载体自带his 标签，方便克隆与纯化。
注：该无风险定制蛋白服务仅适用于800个氨基酸以内的蛋白质。如果您需要表达超过800个氨基酸的蛋白质，我们将按步骤收费。
抗体
试剂盒
多肽
蛋白
组织芯片
