
大肠杆菌表达系统结构简单、遗传背景清楚、目的基因表达水平高、培养周期短等优势,被认为最广泛最经济实惠的经典表达系统,近几十年,大肠杆菌表达系统也不断发展和完善,被科研及工业用户大量用于各种重组蛋白表达。该系统主要用于抗原制备、配体制备以及细胞因子和细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等)蛋白的表达。
天德生物在大肠杆菌蛋白表达和纯化方面拥有丰富的经验,通过不断的优化实验条件能解决蛋白表达纯化过程中的各种疑难问题。

大肠杆菌表达系统结构简单、遗传背景清楚、目的基因表达水平高、培养周期短等优势,被认为最广泛最经济实惠的经典表达系统,近几十年,大肠杆菌表达系统也不断发展和完善,被科研及工业用户大量用于各种重组蛋白表达。该系统主要用于抗原制备、配体制备以及细胞因子和细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等)蛋白的表达。
天德生物在大肠杆菌蛋白表达和纯化方面拥有丰富的经验,通过不断的优化实验条件能解决蛋白表达纯化过程中的各种疑难问题。
| 步骤 | 服务项目 | 服务说明 | 特色 | 周期 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 质粒构建
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密码子优化全基因合成 | 多个载体优化 为了得到最高的表达量蛋白,多个载体同时优化,缩短了货期,让客户有更多的选择。 |
5-8工作日 | |
| PCR扩增产物酶切连接到PCold-SUMO,pGEX-4T-1,pET22b-JT等多个融合载体上 | |||||
| 转化TOP10宿主 | |||||
| 获得测序正确的重组质粒 | |||||
| 2 | 转化及菌株筛选
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构建重组质粒转化到BL21(DE3)、Rosetta-gami B(DE3)pLysS、C41等宿主, 37℃过夜培养 | 多条件优化、多宿主选择 小试中对其温度、IPTG量进行优化,优化出合适的培养条件,同时多个宿主进行转化选择表达量最高的宿主菌。 |
2-3工作日 | |
| 挑取单菌落进行小量诱导表达,SDS-PAGE电泳检测,保种 | |||||
| 进行表达条件优化,确定最佳表达条件 | |||||
| 3 | 目标蛋白表达及纯化
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根据小量结果提供1-10L放大体系表达 | 多条件优化上清表达 表达载体和菌株优化,超低温条件诱导,最大程度保持蛋白可溶性达72%以上 |
5-9工作日 | |
| 多种表达策略和纯化方式同时进行 | |||||
| 4 | 其他(可选)
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通过酶切去除标签 | 灵活的附加服务(可选) 提供多种附加服务,客户可根据实验需求灵活选择 |
3个工作日 | |
| 所有蛋白都可以提供无菌操作和内毒素去除服务 | 2个工作日 | ||||
| 5 | 质控
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进行浓度、纯度等检查,并提供QC报告 | 详细的质控报告 为每个项目提供产品说明书及完善的质控报告 |
3-5工作日 | |
| 总时间 | 15-25工作日 | ||||
注:该无风险定制蛋白服务仅适用于800个氨基酸以内的蛋白质。如果您需要表达超过800个氨基酸的蛋白质,我们将按步骤收费。