单克隆抗体 VS 多克隆抗体,怎么选?
很多时候,实验成功的关键在于我们是否选对了抗体。深入了解单克隆抗体、多克隆抗体和重组抗体在生产、特异性和应用方面的差异,有助于我们的实验取得成功。
一、生产方面的差异
单克隆抗体
单克隆抗体是由单一克隆的 B 细胞产生的抗体,具有高度特异性和一致性。产生单克隆抗体的过程是从动物免疫系统中分离出 B 细胞,与骨髓瘤细胞融合,形成能够产生抗体的杂交瘤细胞。通过筛选和克隆这些杂交瘤细胞,可以获得单一的、高度特异性的抗体细胞系。在单克隆抗体中,兔单克隆抗体具有独特的优势,因为它们能够结合小鼠免疫原性较弱的表位。这种更广泛的表位识别能力特别适用于检测微妙的结构差异和低丰度目标,支持需要特殊特异性和亲和力的应用。
多克隆抗体
另一方面,多克隆抗体是由多个不同的 B 细胞克隆产生的抗体,具有广泛的抗原特异性。多克隆抗体的产生过程是用特定抗原对动物进行免疫,使不同的 B 细胞克隆产生抗体。这些抗体具有不同的结构和抗原特异性,能够识别抗原的不同表位。
以下是个简单的对比
|
单克隆抗体 |
多克隆抗体 |
---|---|---|
成份 |
均质性的抗体分子 |
同类抗体的混合物 |
来源 |
杂交瘤细胞克隆 |
直接来自动物的B细胞 |
成本 |
高 |
低 |
周期 |
长, 6+月 |
短,2-3月 |
一致性 |
批次之间高 |
批次之间低 |
纯度 |
高 |
低 |
特异性 |
高 |
广 |
表位 |
单一表位 |
多表位 |
二、应用方面的差异
在应用方面,单克隆抗体和多克隆抗体的主要区别在于它们的固有特性。单克隆抗体特异性高,一致性好,更适合需要定向定位的情况。多克隆抗体成本低、灵敏度高,更适合定性研究。
针对这两种抗体的固有局限性,具有二种相应的解决策略:1. 通过有针对性地纯化多克隆抗体,可以减轻多克隆抗体的交叉反应。2. 混合使用不同的单克隆抗体,可以实现与不同抗原表位的结合,从而提高抗体的特异性。
◆在进行 Western Blot 或 ELISA 检测时,如果要检测的蛋白质有明确的抗原表位,或者需要确保检测结果的准确性和特异性,那么单克隆抗体可能是更好的选择。如果需要同时检测多种相关蛋白,或者目标蛋白的具体位置不确定,多克隆抗体可能更适合。
◆在免疫组化(IHC)和免疫荧光中,我们选择多克隆抗体,因为其特异性更强、信号更强、成本相对较低、对抗原变异的耐受性更好,从而能更好地满足复杂组织样本分析的要求。组织样本中可能存在多种蛋白质,使用多克隆抗体可以同时检测多种目标蛋白质,从而更全面地了解样本中蛋白质的表达情况。
◆在流式细胞术中,单克隆抗体具有高度特异性。染色后的荧光强度与抗原表达水平呈线性相关,不同批次之间的差异极小。虽然多克隆抗体可产生更强的信号,但其特异性较低。染色后的荧光强度与抗原水平不呈线性关系,不同批次之间的差异也很大。因此,单克隆抗体被用于流式细胞仪检测。
◆在免疫疗法和疫苗生产中,确保治疗效果或疫苗功效的特异性至关重要。单克隆抗体具有高度特异性,只能识别目标抗原的特定表位,从而确保治疗或疫苗的特异性和一致性。此外,使用单克隆抗体还能降低多克隆抗体引起免疫反应的风险。多克隆抗体可能会与患者自身的蛋白质发生交叉反应,从而导致不良反应或免疫原性问题。最后,单克隆抗体的生产过程可以得到更好的控制,确保每批抗体的质量和特性保持一致。
◆在进行免疫沉淀时,我们总是选择多克隆抗体。多克隆抗体通常可以与目标蛋白质的多个表位结合,提供更强的信号,提高免疫沉淀复合物的信号强度。此外,在免疫沉淀实验中,在不同的样品或条件下可能会遇到目标蛋白的变异或亚型,而多克隆抗体对抗原变异具有耐受性。多克隆抗体的成本也相对较低。
下表是常规应用所选抗体
|
单克隆抗体 |
多克隆抗体 |
---|---|---|
WB |
✔ |
✔ |
ELISA |
✔ |
✔ |
免疫组化 |
✘ |
✔ |
流式细胞术 |
✔ |
✘ |
免疫荧光 |
✘ |
✔ |
免疫沉淀 |
✘ |
✔ |
免疫疗法 |
✔ |
✘ |
疫苗生产 |
✔ |
✘ |
重组抗体
重组抗体是通过基因工程技术合成的抗体,涉及不同来源基因片段的组装,以产生具有特定功能和特性的抗体。这些抗体通常由人工合成的单链抗体或 Fab 片段组成,这些片段可以是从动物免疫系统中获取的免疫球蛋白基因的人工生成形式,也可以是人源化抗体。
重组抗体具有多种优势:
-
可控性和可重复性:重组抗体的生产过程可以严格控制。
-
人类来源: 重组抗体可由源自人类或人类来源的基因构建而成,因此人体免疫反应较少,从而降低了不良反应的风险。
-
工程优势:重组抗体可通过基因工程技术进行改造和改良,以提高其稳定性、亲和力和特异性。
-
多样性:重组抗体技术可以合成具有不同功能和特性的抗体,以满足各种疾病治疗和诊断的需要。
三、总结
单克隆抗体具有高度特异性和一致性,可在各种检测中精确识别目标。多克隆抗体具有广泛的抗原识别能力,可提高检测灵敏度和覆盖范围,通常用作二抗。重组抗体的优势在于其可控性、人类来源、工程优势和多样性,为医学和科学研究提供了更可靠、更灵活的工具。
无论您的项目需要单克隆、多克隆或重组抗体,选择合适的抗体生产服务对于研究和诊断中的一致性、灵敏度和可扩展性都至关重要。
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